Naskórkowy czynnik wzrostu (EGF) został pierwotnie odkryty w surowych preparatach czynnika wzrostu nerwów przygotowanych z mysich gruczołów podżuchwowych jako aktywność, która indukowała wczesne otwarcie powiek, wyrzynanie siekaczy, zahamowanie wzrostu włosów i zahamowanie wzrostu po wstrzyknięciu nowonarodzonym myszom. Jest to prototyp rodziny czynników wzrostu, które wywodzą się z prekursorów zakotwiczonych w błonie. Wszyscy członkowie tej rodziny charakteryzują się obecnością co najmniej jednej jednostki strukturalnej EGF (definiowanej przez obecność konserwatywnego motywu 6-cysteinowego, który tworzy trzy wiązania dwusiarczkowe) w ich domenie zewnątrzkomórkowej. EGF jest początkowo syntetyzowany jako prekursorowe białko transbłonowe o masie 130 kDa zawierające 9 jednostek EGF. Dojrzała rozpuszczalna sekwencja EGF odpowiada jednostce EGF zlokalizowanej w pobliżu domeny transbłonowej. Prekursor błonowy EGF jest zdolny do wiązania się z receptorem EGF i stwierdzono, że jest biologicznie aktywny. Dojrzały szczurzy EGF ma 70 % identyczności sekwencji aa z dojrzałym ludzkim EGF.
Źródło
Escherichia coli.
Waga molekularna
Około 6.1 kDa, pojedynczy nieglikozylowany łańcuch polipeptydowy zawierający 53 aminokwasy, w tym 3 wewnątrzcząsteczkowe wiązania dwusiarczkowe.
Aktywność biologiczna
W pełni aktywny biologicznie w porównaniu ze standardem. ED50, określone w teście proliferacji komórek przy użyciu mysich komórek Balb/c 3T3, jest mniejsze niż 0.1 ng/ml, co odpowiada specyficznej aktywności > 1.0 x 107 IU/mg.
Liofilizowany z 0.2 µm filtrowanego roztworu w PBS, pH 7.4.
Endotoksyna
Mniej niż 1 EU/ug rRtEGF, jak określono metodą LAL.
Rekonstytucja
Zalecamy krótkie odwirowanie fiolki przed otwarciem w celu sprowadzenia zawartości na dno. Rozpuścić w sterylnej wodzie destylowanej lub wodnym buforze zawierającym 0.1% BSA do stężenia 0.1-1.0 mg/ml. Roztwory podstawowe należy podzielić na porcje robocze i przechowywać w temperaturze ≤ -20 °C. Dalsze rozcieńczenia należy wykonać w odpowiednich zbuforowanych roztworach.
Stabilność i przechowywanie
Użyj ręcznej zamrażarki do rozmrażania i unikaj powtarzających się cykli zamrażania-rozmrażania.- 12 miesięcy od daty otrzymania, od -20 do -70 °C, jak dostarczono.- 1 miesiąc, 2 do 8 °C w sterylnych warunkach po rekonstytucji.- 3 miesiące, -20 do -70 °C w sterylnych warunkach po rekonstytucji.
